分子筛（凝胶过滤层析）蛋白纯化系统的应用

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2026-08-17            环球过滤分离技术网              guolvfenlitech6



[color=rgba(0, 0, 0, 0.8)]     凝胶过滤[color=rgba(0, 0, 0, 0.8)]层析[color=rgba(0, 0, 0, 0.8)]又称[color=rgba(0, 0, 0, 0.8)]分子筛[color=rgba(0, 0, 0, 0.8)]&[color=rgba(0, 0, 0, 0.8)]层[color=rgba(0, 0, 0, 0.8)]析或排阻层析，是基于分子量差异对物质进行分离的液相色谱技术。 其[color=rgba(0, 0, 0, 0.8)]原理[color=rgba(0, 0, 0, 0.8)]利用多孔网状结构凝胶颗粒作为固定相，大分子因无法进入孔穴而快速洗脱，小分子进入孔隙路径较长，洗脱时间滞后，从而实现按分子大小分离的目的。 凝胶材质包括葡聚糖、琼脂糖、聚丙烯酰胺及其交联聚合物等多孔性物质。 该技术主要应用于生物大分子脱盐、分级分离、分子量测定（标准曲线法）及去除热源物质。
分子筛层析,其应用领域主要包括以下方面：
1）脱盐：
高分子（如蛋白质、核酸、多糖等）溶液中的低分子量杂质，可以用分子筛层析除去，这一操作称为脱盐。本法脱盐操作简便、快速，蛋白质和酶类等在脱盐过程中不易失活，样品体积可达柱床体积的25%-30%，为了防止蛋白质脱盐后溶解度降低会形成沉淀吸附于柱上，一般用醋酸铵等挥发性盐类缓冲液使层析柱平衡，然后加入样品，再用同样缓冲液洗脱，收集的洗脱液用冷冻干燥法除去挥发性盐类。
2）分离提纯：
分子筛层析已广泛用于酶、蛋白质、氨基酸、多糖、生物碱等物质的分离提纯。
3）测定高分子物质的分子量：
用一系列已知分子量的标准品放入同一凝胶柱内，在同一条件下层析，记录每一分钟成分的洗脱体积，并以洗脱体积对分子量的对数作图，在一定分子量范围内可得一直线，即分子量的标准曲线。测定未知物质的分子量时，可将此样品加在测定了标准曲线的凝胶柱内洗脱后，根据物质的洗脱体积，在标准曲线上查出它的分子量。
4）高分子溶液的浓缩：
通常将Sephadex G-25或50干胶投入到稀的高分子溶液中，这时水分和低分子量的物质就会进入凝胶粒子内部的孔隙中，而高分子物质则排阻在凝胶颗粒之外，再经离心或过滤，将溶胀的凝胶分离出去，就得到了浓缩的高分子溶液。




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